أطروحة دكتوراه في طب بابل عن بكتريا القولون المنتجة لإنزيمات AmpC

ناقشت كلية الطب فرع الاحياء المجهرية أطروحة طالب الدكتوراه محمد جاسم خليف، حضرها عميد الكلية الاستاذ الدكتور مهند عباس الشلاه ورئيس الفرع الاستاذ الدكتورة هيام خالص المسعودي وعدد كبير من تدريسيي الفرع وطلبة الدراسات العليا، وقد كان عنوان الاطروحة (دراسة تواجد العزلات السريرية لبكتريا E. coli المنتجة لإنزيمات البيتالاكتاميز ( AmpC) المحمولة على البلازيميد في محافظة بابل )بإشراف الاستاذ الدكتور علاء هاني الجراخ.
بين الباحث خلال دفاعه عن اطروحته ان بكتريا الإشريكية القولونية هي بكتريا تعايشية مع البشر وكذلك في العديد من أنواع الحيوانات، في الجهاز الهضمي البشري تفتقر إلى الضراوة. ومع ذلك، عندما توجد خارج الأمعاء ، يمكن أن تسبب الإشريكية القولونية عدة أمراض وقد ظهرت مقاومة مضادات الميكروبات (AMR) كواحدة من مشاكل الصحة العامة الرئيسية في القرن الحادي والعشرين. تم اكتشاف إنزيمات البيتالاكتاميز واسعة الطيف ESBLs وإنزيمات AmpC في جميع أنواع العائلة المعوية تقريبًا.
وقد تم خلال الدراسة عزل الإشريكية القولونية من عينات سريرية مختلفة والتي تتضمن الإدرار وإفرازات الحروق والإفرازات المهبلية والبلغم وقرحة القدم السكرية والبراز والسائل الدماغي الشوكي والدم ومسحة الأذن عن طريق الزراعة على MacConkey agar ، Eosin Methylene blue agar بالإضافة إلى العديد من الاختبارات الكيميائية الحيوية لغرض تشخيص البكتريا.
كما تم الكشف عن قدرة إنتاج البيتالاكتميز لجميع عزلات الإشريكية القولونية وذلك باستخدام النيتروسيفين، وتم إجراء حساسية المضادات الحيوية لعزلات الاشريكية المنتجة للبتالاكتميز وفقا لــــ CLSI ، 2023 باستخدام جهاز الفايتك 2 وطريقة انتشار الاقراص.
استخدم تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للكشف الجيني عن جينات البلازميد Amp C, وجينات ESBL وجينات الكاربابنيمز وجينات مقاومة الكوينولون المحموله على البلازميد (PMQR) وجينات مقاومة للامينوكلايكوسيد وجينات مقاومة الكوليستيين وintegrin class 1 وأخيرا تم إجراء تسلسل الحمض النووي لبعض الجينات العائدة Amp C.
وجدت النتائج أنه من بين 1874 عينة سريرية، كانت 231 عزلة للاشريكية القولونية, 112 (48.5?) منتجه للبيتالاكتميز. كان معدل عزل الإشريكية القولونية غالبا من البراز (61.4?) يليه البول (18.4?). فيما يتعلق بجنس المرضى، تم جمع عزلات الإشريكية القولونية من البول في الغالب من المرضى الإناث (65.3?)، في حين الحروق وقرحة القدم السكري في الغالب من الذكور (63.3?) و (69.3?) على التوالي.
بالنسبة لفحص المضادات الحيوية ASTتم فحص الإشريكية القولونية تجاه 30 نوعا من المضادات الحيوية تنتمي إلى 15 صنف، 14 نوع منها يعود لمضادات البيتالاكتام و 16 نوعا من غير البيتالاكتام، وكشفت النتائج أن جميع العزلات كانت مقاومة للأمبيسيلين، أموكسيسيلين، أموكسيسيلين/كلافولونات، وبيبيراسيلين (99.1?). فيما يتعلق بالعينات السريرية ، كانت الإشريكية القولونية المعزولة من البول عالية المقاومة للسيفازولين (94.6?) والسيفترياكسون (92.8?) والأستريونيم (75?) وحمض الناليديكسيك (89.3?). كانت الإشريكية القولونية المعزولة من الإفرازات المهبلية عالية المقاومة للسيفازولين (100?) ، والأستريونيم (100?) وسيبروفلوكساسين (100?) والليفوفلوكساسين (100?) وسبارفلوكساسين (100?) وحمض الناليديكسيك (100?). كانت الإشريكية القولونية المعزولة من قرحة القدم السكري عالية المقاومة للسيفازولين (100?) و سيفترياكسون (100?) و أزتريونيم (100?) و سيبروفلوكساسين (85.7) وليفوفلوكساسين (85.7?) و سبارفلوكساسين (85.7?) ونورفلوكساسين (85.7?)
على الرغم من ذلك، كانت عزلات الاشريشية القولونيه حساسة للميروبينيم (100?) وتيجيسيكلين (100?) وإرتابينيم (96.5?) وإمبينيم (95.5?) وأميكاسين (92?) وإيسيباميسين (98.2). جميع العزلات اظهرت نمط MDR لمقاومة الإشريكية القولونية. من بين 112 عزلة إشريكية قولونية منتجه للبتالاكتميز (67?) كانت ESBL (3,5?) مقاومة للكاربابينيم و(33?) كانت مقاومة للامينوكلايكوسايد و(65.1?) كانت مقاومه للكوينولون (24.1?) كانت مقاومة للكوليستين.
كشفت نتائج تفاعل البوليمر المتسلسل لجينات ESBL عن ارتفاع معدل انتشار bla CTX-M 100?، بين عزلات الاشريشية القولونية المنتجة ل ESBL ، تليها bla SHV (87.8?) ، bla OXA (85.1?) و bla TEM (79.7?).
كانت نتائج تفاعل البوليمر المتسلسل لجينات الكاربابينيماز هي ablOXA (100?) و blaNDM (75?) ، وجينات مقاومة الكوينولون بوساطة البلازميد qnr A (35.5?) وqnr B (32.2?)، وجين أمينوكليكوسيدات ACC(6)Ib-cr (100?) ، وجينات مقاومة الكوليستين mcr 2(55.5?) و mcr 3(22.2?) ، وأخيرا تم اكتشاف integrin class 1 في (99.1?).
فيما يتعلق بجينات pAmpC ، أظهرت نتائج تفاعل البوليمر المتسلسل انتشارا مرتفعا لجينات BlCMY (88.5?) تليها BlCIT (57.7?) و BlDHA (42.3?) ،الجينات BlFOX ، BlMOX ، BlEBC ، BlACC لم يعثر عليها في الدراسة الحالية.
من بين 26 عزلة اشريشية قولونية منتجة ل pAmpC ،هنالك عزله واحده (3.85?) تحمل 3 أنواع من جينات pAmp C ، و 19عزله (73?) تحمل نوعين من pAmpC ، و 5 عزلات (19.3?) تحمل جين واحدة وعزله واحده (3.85?) لا تحمل أي واحد من جينات الدراسة. تم الكشف عن تسلسل الحمض النووي ل bla DHA و bla CIT ، وكلها متوافقة مع blaDHA عند مقارنتها ب NCBI بنقاوة 100? ، blaCIT مشابهة جدا bla CMY-42.
من هذه الدراسة, يمكن ان نستنتج ان ESBL كانت اكثر انتشارا من AmpC في الاشريشية القولونية المنتجة للبيتالاكتميز لكن Amp C كانت اكثر مقاومة للمضادات الحيوية عند مقارنتها ب ESBL , جميع عزلات الاشريشية القولونية كانت مقاومة للامبسيلين والاموكسيسلين والاموكسيسلين / الكلافولونات , في حين انها حساسة للاميكاسين وامبينيم وميرونيم والتيكيسايكلين. تم الكشف عن ارتفاع معدل انتشار جينات ESBL وجينات AmpC مثل جين blaCMY وجين ACC(6) Ib-cr وجين integrin class 1 بين عزلات الاشريكية القولونية MDR.
بقلم: عباس مجيد