مناقشة اطروحة دكتوراه في طب بابل عن بكتريا الاشريكية القولونية المقاومة للمضادات الحيوية
جرت صباح يوم الثلاثاء الموافق 2/11/2021 على قاعة الدراسات العليا في كلية الطب جامعة بابل مناقشة علنية في علم الاحياء المجهرية لأطروحة طالبة الدكتوراه ايمان فاضل عبد الحسين، حضرها عميد الكلية الاستاذ الدكتور صفاء صاحب ناجي الغزالي ورئيس الفرع الاستاذ الدكتورة هيام خالص المسعودي وعدد من تدريسيي الفرع وطلبة الدراسات العليا، وقد كان عنوان الاطروحة (التوصيف الجزيئي وانتاج الجايريز في بكتريا الاشريكية القولونية المقاومة للمضادات الحيوية الفلوركيونيلون والمعزوله من عينات سريرية مختلفة)
حيث تألفت لجنة المناقشة من الاستاذ الدكتورة احلام كاظم نعيم رئيساً والاستاذ الدكتورة ميساء صالح مهدي عضواً " والاستاذ الدكتورة لميس عبد الرزاق عضواً " والاستاذ المساعد الدكتورة فاطمة مالك عبود عضواً" والاستاذ المساعد الدكتور احمد حقي اسماعيل عضوا" والاستاذ الدكتور محمد صبري عبد الرزاق عضواً ومشرفاً".
بينت الباحثة انه تم جمع 200 عينة سريرية من مرضى يعانون من عدوى مختلفة مثل التهاب المسالك البولية والتهاب المعدة والأمعاء (الإسهال) والتهاب المهبل والتهابات الجروح ؛ الذين حضروا إلى مستشفيين رئيسيين في محافظة كربلاء المقدسة: مستشفى الحسيني التعليمي العام ، ومستشفى كربلاء للولادة والأطفال خلال فترة (شباط - حزيران 2020). تم أخذ عينات من المرضى الذين تتراوح أعمارهم من 5 إلى 66 سنة من الذكور والإناث. اظهرت النتائج ان هناك 30 عينة تم تشخيصها على أنها سلالات سريرية للإشريكية القولونية من كلا الجنسين وأعمار مختلفة بعد تحديدها عن طريق اجراء الاختبارات الكيمياء الحيوية ، ونظام VITEK-2 ، وبالطريقة الجزيئية باستخدام ماركر 16SrDNA. تم إجراء اختبار الحساسية لمضادات الميكروبات وتركيز التثبيط الأدنى (MIC) لحمض الناليديكسيك ، نورفلوكساسين ، سيبروفلوكساسين ، ليفوفلوكساسين ، وجاتيفلوكساسين بطريقة التخفيف الدقيق للمرق. وكذلك تم فحص جميع السلالات لجينات PMQR وهي (qnrA ، qnr B ، qnrS) وكذلك عوامل مضخة التدفق (Mar RAB ، rob ، SoxRS) وجين الترميز Gyrase A ؛ بواسطة طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل بعد استخلاص الحمض النووي من العزلات السريرية المختبرة للإشريكية القولونية. بالإضافة إلى تقدير نشاط إنزيم Gyrase في العينات قيد الدراسة.
أظهرت نتائج عزل بكتيريا الإشريكية القولونية ;تواجدها بدرجة عالية في عينات المهبل وبنسبة (40?) ثم من عينات البول (32?) تليها (24?) من التهابات الجروح و (21?) من البراز. وكانت اعلى نسبة (33.33?) في المجموعة العمرية (31-45) سنة بينما كان أقل حدوث في المجموعة العمرية (60) وبنسبة (10?) عند الإناث. كذلك فان الإناث كانت لديها زيادة ملحوظة في وتيرة E. coli مقابل الذكور بنسبة (إناث: ذكور 87?: 13?).
في هذه الدراسة خضعت العزلات لاختبار الحساسية (DDT) وفقا لدليل CLSI ,2020ووجد أن العزلات البكتيرية أظهرت مقاومة عالية للجيل الأول (حمض الناليديكسيك 86.36?) ، والجيل الثاني (سيبروفلوكساسين 66.66?) ، (نورفلوكساسين 63.33?) ، بينما في الجيل الثالث (ليفوفلوكساسين 27.27?) ، وأخيراً الجيل الرابع (سيبروفلوكساسين). جاتيفلوكساسين 13.33?).
تم استخدام بادئات نوعيه (Primers ) في تقنية تفاعل البلمرة المستلسل (PCR) للتحري عن الجينات الخاصة بمقاومة مضادات الكيونيلون qnr) ) وأظهر الفحص الجزيئي ان النسبة الإجمالية لعزلات الإشريكية القولونية التي تحتوي على جينات qnr كانت (21/30) (70?). وكانت 14/30 عزلة تؤوي جينات qnr في صورة مختلطة أو مجمعة بنسبة (46.66?) و 7/30 (23.33?) عزلات تؤوي qnr في شكل منفرد .كان معدل انتشار qnr A و qnr B و qnrS بنسبة ,40? 43.33 ? و 53.33? على التوالي . اظهرت عزلات E.coli المقاومة لمضاد Nalidix احتواءها على جينات qnr A و B و S) في دراستنا بنسبة 24? ، 12? ، 36? على التوالي في حين كانت العزلات المقاومة للسيبروفلوكساسين والتي تحمل جينات qnrA و qnr B وS qnr 15.8? و 5.3? و 26.3? على التوالي. ظهرت عزلات E.coli المقاومة الليفوفلوكساسين التي تحمل جينات qnrA و qnr B و qnrS بنسبة 37.5? و 75.0? و 37.5? على التوالي. أخيرا؛ كان أدنى معدل انتشار لجينات qnrA و B و S ضد المضاد الحيوي Gatifloxacin حيث كانت ؛ بنسبة (0%,0%, (25? على التوالي.
تم العثور على أوبرون مقاومة المضادات الحيوية المتعددة للإشريكية القولونية mar RAB في 90? (27/30) من العزلات وكذلك بلنسبة للجين المشفر للارتباط البروتيني الصحيحrob gene في 27 عزلة مع نسبة انتشار (90?) ؛ في حين أن اثنين وعشرين عزلة من ثلاثين عزلة من بكتيريا الإشريكية القولونية المختبرة تحتوي على جين soxRS بنسبة (73.33?). (100?) ؛ بينما لا يوجد سوى 16 عزلة من أصل 30 عزلة تواجد فيها انزيم الالتفاف الفائق نشط وبنسبة(53.33?) فقط بينما البقية ؛ (14) عزلة كانت حاوية على إنزيم الالتفاف الفائق (gyrase enzyme) بشكل غير وظيفي وبنسبة 46.67)%).
اظهرت الدراسة ارتباط وجود انزيم الالتفاف الفائق بمستويات عالية من المقاومة لمضادات الكيونولون قيد الدراسة ; حيث ظهرت العزلات المقاومة للمضاد الناليديكسيك مع انزيم فائق الالتفاف غير فعال بنسبة (44?) من مجموع العينات السريرية المقاومة NA.اما مضاد في العزلات المقاومة لسايبروفلوكسساسين , فقد كان الانزيم فعالا بنسبة 35% من مجموع العزلات الكلي المقاومة لمضاد السايبروفلوكساسين .كما وجد ان الانزيم كان فعالا بنسبة (42.11%) وغير فعال بنسبة (57.89%) من المجموع الكلي من العزلات المقاومة لمضاد النورفلوكساسين . واخيرا فان سلالات الإشريكيا القولونية والمقاومة ليفوفلوكساسين مع انزيم فعال كانت بنسبة (? 50) مع عزلات وكذلك الحال في السلالات المقاومة للمضاد الحيوي جاتيفلوكساسين بنسبه (50%).
بقلم : عباس مجيد