مناقشة رسالة ماجستير في طب بابل حول بكتريا Acinetobacter baumannii
جرت صباح يوم الاثنين الموافق 4/7/2022 في كلية الطب جامعة بابل مناقشة علنية في علم الاحياء المجهرية لطالبة الماجستير نادية عبد العباس كاظم عن رسالتها الموسومة (توصيف أنظمة CRISPR-Cas لبكتريا Acinetobacter baumannii المقاومة لعدد من المضادات الحياتية المعزولة من العزلات السريرية) حضرها عميد الكلية الاستاذ الدكتور مهند عباس الشلاه والمعاون الاداري الاستاذ الدكتور كاظم جواد الحمداني ورئيس الفرع الأستاذ الدكتورة هيام خالص المسعودي وعدد من التدريسين وطلبة الدراسات العليا، حيث تألفت لجنة المناقشة من الأستاذ الدكتورة احلام كاظم نعيم رئيسا وعضوية كل من الأستاذ الدكتورة الاء فاهم عباس والأستاذ المساعد الدكتورة زينب عادل غني جابك والاستاذ الدكتورة ميساء صالح مهدي عضوا ومشرفا.
بينت الباحثة انه تعد A. baumannii من مسببات الأمراض الانتهازية السالبة لصبغ الجرام، والتي تسبب التهابات شديدة ويصعب علاجها. تم جمع (150) عينة سريرية من مرضى يعانون من التهابات مختلفة. وتم تنمية جميع العينات السريرية على وسط الدم وسط MacConkey و CHROMagar ثم تم تأكيد تشخيص بكتريا A. baumannii عن طريق الاختبار البيوكيميائية جهاز vitek 2. بعدها تم إجراء اختبار الحساسية للمضادات الحيوية بطريقة انتشار القرص القياسية لعشرة مضادات ميكروبات مختلفة. بعدها تم قياس قدرة تكوين الغشاء الحيوي بواسطة البكتريا عن طريق طريقة لوحة زراعة الأنسجة.
علاوة على ذلك، تم فحص تأثير AgTIO2 و SWCN-OH ضد نمو عزلات A. baumannii والغشاء الحيوي بشكل منفصل عن طريق إجراء خمسة تخفيفات متسلسلة مزدوجة عند (1/2 ، 1/4 ، 1/8 ، 1/16 و 1/32) تركيز المحلول الاصلي (تركيز 1000 ميكروغرام / ملـــ).
للوصول إلى وجود الجين cas ، تم أولاً استخلاص الحمض النووي من جميع عزلات A. baumannii وتم إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل المتعدد لتضخيم ستة جينات مختلفة. اما بالنسبة للتنوع الجيني، تم اجراء BOX-PCR و ERIC-PCR و تحليل النتائج المستحصلة باستخدام PyElph الإصدار 1.4. تم إنشاء مخططات dendrograms باستخدام طريقة مجموعة الزوج غير الموزونة بمتوسط حسابي (UPGMA).
أظهرت النتائج ان ثلاثة وعشرون عينة تابعة لبكتريا وبنسبة (15.3?) من العدد الكلي للعينات ، و كالتالي 12 عزلة (26.6?) من البلغم ، وخمس عزلات (14.2?) من الحروق ، وثلاث عزلات (7.5?). من الجروح وثلاثة (10?) من البول. وجميع هذه العزلات كانت مقاومة لـ Cefepime (?100) بينما في حالة مضادات الميكروبات الأخرى ظهرت النتائج التالية (91?) مقاومة إلى Trimethoprim-Sulfamethoxazole ، (? (80 Gentamicin ، Amikacin ، (? (77 Ciproloxacin ، Ceftazidime ،Levofloxacin، (73?) إلى Amoxicillin-clavulanica acid، و (70?) Meropenem ، بينما تنخفض نسبة المقاومة (50?) Tetracyclin.
في هذه الدراسة جميع عزلات A.baumannii قادرة على تكوين بيوفيلم قوي. لذلك ، تم اختبار تأثير AgTIO2 والأنابيب النانوية الكربونية أحادية الجدار (SWCN-OH) على نموها والغشاء الحيوي ، وأظهرت النتائج أن هناك انخفاضًا كبيرًا في نمو البكتيريا والغشاء الحيوي بعد التعرض للتخفيف التسلسلي المزدوج لـ AgTIO2 الأنابيب النانوية الكربونية الأحادية الجدار، لكن كانت الفعالية الاكبر بواسطة SWCN-OH.
أظهرت نتائج التحليلات الجينية التي تهدف إلى الكشف عن جينات cas لـ A. baumannii أن جميع العينات المدروسة تحتوي على هذا الجين على النحو التالي ، تم العثور على الجين Cas1 بحجم 506 bp و cas2 196 bp و cas3 850 bp في 5 (25?) ، 3 (15?) ، 9 (45?) من العزلات على التوالي. تم اكتشاف الجين cas 5 في 3 (15?) من العزلات ، والجين cas 6 في 7 (35?) من العزلات ، وأخيراً الجين cas 9 في 6 (30?) من العزلات.
في حالة النوع I-F CRISPR-Cas جين (الذي ينتمي إلى نظام النوع الأول) ، تم تحديد هذا الجين (حوالي 157) في 7 من اصل 20 عينة من العينات المتنوعة وعلى النحو التالي: 3 (100?) بول ، 2 (22.22?) بلغم ، 1 ( 20?) حروق و 1 (33.3?) جروح.
اما بالنسبة لاكتشاف التنوع الوراثي لل BOX و ERIC-PCR في A. baumannii المعزولة من عينات مختلفة ، بشكل عام ، كانت لعزلات جميعها مميزة باستخدام الطريقتين الجزيئيتين وأنتجت التقنيتان الجزيئيتان مجموعتان رئيسيتان ونتائج مخطط الشجرة لهذه التقنيات تكشف أن 20 جميع العزلات متعدد الأشكال بين عزلات A. baumannii السريرية تم اكتشافها بواسطة ERIC و BOX PCR.
في الختام، تُظهر البيانات ارتباطًا بين عوامل الضراوة وتكوين الأغشية الحيوية بين سلالات MDR A. baumannii العراقية وتساعد هذه البيانات على فهم المقاومة البكتيرية وبقائها في المستشفيات العراقية. بالإضافة إلى فعالية الجسيمات النانوية التي قد تساعد في المستقبل على التحكم في الانتشار بعد اجراء الدراسات التكميلية التجريبية الأخرى.
بقلم : عباس مجيد